高效液相色譜(HPLC)是色譜法的一個重要分支,其應用范圍廣泛,對樣品的適用性廣,且不受分析對象的揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制。 幾乎所有的化合物,包括高沸點、極性、離子化合物和大分子物質都可以用高效液相色譜法進行分析測定,從而彌補了氣相色譜法的缺點。 目前已知的有機化合物中,約20%可以通過氣相色譜法進行分析,而80%需要通過高效液相色譜法進行分析。 高效液相色譜法具有分離效率高、分析速度快、檢測靈敏度好等特點,可以分析分離高沸點且不能汽化的熱不穩(wěn)定生理活性物質。 分離與分析技術在該領域的重要應用。
基本原理
色譜法的分離原理是:溶于流動相中的各組分經過固定相時,由于與固定相(stationphase)發(fā)生作用(吸附、分配、排阻、親和)的大小、強弱不同,在固定相中滯留時間不同,從而先后從固定相中流出。又稱為色層法、層析法。
高效液相色譜法以經典的液相色譜為基礎,以液體為流動相,采用高壓輸液系統(tǒng),將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有顆粒極細的高效固定相的色譜柱,在柱內各成分被分離后,進入檢測器進行檢測,從而實現(xiàn)對試樣的分析。
系統(tǒng)組成
HPLC 系統(tǒng)一般由輸液泵、進樣器、色譜柱、檢測器、數(shù)據(jù)記錄及處理裝置等組成。其中輸液泵、色譜柱、檢測器是關鍵部件。此外,還可根據(jù)需要配置梯度洗脫裝置、在線脫氣機、自動進樣器、預柱或保護柱、柱溫控制器等,現(xiàn)代HPLC 儀還有微機控制系統(tǒng),進行自動化儀器控制和數(shù)據(jù)處理。制備型HPLC 儀還備有自動餾分收集裝置。